MICROBIOLOGIA PARA CONTROL DE CALIDAD DE MEDICAMENTOS

 

https://youtu.be/gBiTYPRLluw?si=fNlSupOsyNyGWRi6

Ivan Patoff

25 mayo 2020

Este recurso audiovisual detalla los protocolos de microbiología aplicados al control de calidad en la industria farmacéutica, diferenciando entre productos estériles y no estériles. El contenido explica los ensayos obligatorios según la farmacopea, tales como el recuento de microorganismos, las pruebas de esterilidad y la detección de pirógenos mediante el uso de conejos o reactivos específicos. Se enfatiza la importancia de validar los procesos de llenado aséptico y realizar un monitoreo ambiental constante del aire, las superficies y el personal. Además, el material analiza cómo identificar el origen de una contaminación a través de gráficos de control durante la producción. Finalmente, se presentan los límites permitidos y los métodos de neutralización necesarios cuando los medicamentos poseen actividad antimicrobiana propia.

A continuación, se presenta un listado numerado de los temas principales tratados en la conferencia sobre microbiología en el control de calidad farmacéutico:

1. Clasificación de productos farmacéuticos: Se establece la división fundamental entre productos estériles (inyectables, colirios, polvos para inyección) y no estériles (comprimidos, cápsulas, cremas),.
2. Marco regulatorio y normativo: Referencias a la Farmacopea Argentina (capítulos 90, 370, 340 y 330), la Farmacopea de Estados Unidos (USP), la Farmacopea Europea y las disposiciones de la ANMAT,,,,,.
3. Control higiénico para productos no obligatoriamente estériles:
   • Realización de controles negativos, test de promoción de crecimiento (aptitud de los medios de cultivo) y test de aptitud del sistema (interferencia de la forma farmacéutica),,,.
   • Estrategias para neutralizar la actividad antimicrobiana intrínseca del producto,.
   • Metodologías de recuento (filtración por membrana, vertido en placa, extensión y número más probable) y límites microbiológicos establecidos,,.
4. Control de microorganismos específicos: Pruebas de ausencia o presencia limitada de patógenos particulares mediante ensayos en condiciones específicas,,.
5. Control de esterilidad:
   • Requisitos de entorno y vestimenta del operador,.
   • Métodos de filtración por membrana e inoculación directa,.
   • Tiempos y temperaturas de incubación en medios TSB y Tioglicolato,.
   • Interpretación de resultados y criterios para la repetición de ensayos,.
6. Pirógenos y Endotoxinas Bacterianas:
   • Diferencia entre pirógenos endógenos y exógenos (endotoxinas de bacterias Gram negativas),,.
   • Test de pirógenos en conejos: Procedimiento, criterios de la USP vs. Farmacopea Europea e interpretación de la suma de incrementos de temperatura,,,.
   • Test de Endotoxinas Bacterianas (LAL): Técnicas de gelificación (gel-clot), turbidimetría y cromogénicas,,.
   • Cálculos de límite de endotoxinas y dilución máxima válida (MVD),.
7. Monitoreo ambiental:
   • Muestreo de aire: Métodos pasivos (sedimentación) y activos (volumétricos como el de ranura o centrífugo),,.
   • Control de superficies mediante hisopados o placas de contacto (placas RODAC),,.
   • Evaluación microbiológica del personal (guantes y vestimenta),.
   • Frecuencia de monitoreo y límites permitidos según la clase de área (A, B, C, D),,.
8. Validación del llenado aséptico (Media Fill):
• Objetivo de evaluar la susceptibilidad de contaminación del sistema (personal, ambiente, equipos),.
• Parámetros del ensayo: Selección de medios de cultivo, cantidad de unidades a llenar, velocidad de llenado e intervenciones del personal,,,.
• Criterios de aceptación e investigación de fallas mediante el análisis de gráficos de contaminación,,.

En el control de calidad microbiológico, la división fundamental de los productos farmacéuticos se basa en su requerimiento de esterilidad, una distinción que es aceptada por la legislación y la Farmacopea Argentina.

A continuación, se detalla la clasificación según lo expuesto en la conferencia:

1. Productos Estériles

Para este grupo de productos, la esterilidad es una condición obligatoria debido a su vía de administración o su uso específico.

• Ejemplos comunes: Incluyen soluciones inyectables, polvos para inyección (liofilizados), colirios, ungüentos y diversos dispositivos médicos.
• Exigencias normativas: La Farmacopea Argentina establece que estos productos deben someterse a:
  • Control de esterilidad: Según el capítulo 370.
  • Límite de pirógenos o endotoxinas bacterianas: Evaluados mediante los capítulos 340 (test en conejos) o 330 (test de LAL), respectivamente.

2. Productos No Estériles (No obligatoriamente estériles)

Son medicamentos que, por su naturaleza y vía de administración, no requieren estar libres de toda forma de vida microbiana, aunque sí deben mantener una carga microbiológica controlada.

• Vías de administración: Generalmente se trata de productos para vía enteral (oral) o tópica.
• Ejemplos comunes: Comprimidos, cápsulas, soluciones orales, suspensiones y cremas.
• Exigencias normativas: Estos productos se rigen por el capítulo 90 de la Farmacopea Argentina, el cual exige:
  • Límites microbiológicos: Un recuento máximo permitido de microorganismos.
  • Ausencia de microorganismos específicos: La garantía de que no existan patógenos particulares que representen un riesgo para el consumidor.

Es importante destacar que, aunque un producto sea clasificado como no estéril, pueden existir condiciones especiales donde se requieran controles particulares de ciertos microorganismos dependiendo de la forma farmacéutica o el uso previsto.

El marco regulatorio y normativo es el pilar que define los estándares de calidad y seguridad para los productos farmacéuticos. Según la conferencia, este marco se compone de normativas locales e internacionales que establecen tanto los límites permitidos como las metodologías de ensayo obligatorias.

A continuación, se detallan los componentes principales de este punto:

1. Farmacopea Argentina (Codificación Nacional)

Es el referente legal primario en el país y divide los requerimientos según el tipo de producto. Los capítulos clave mencionados son:

• Capítulo 90: Define los límites microbiológicos y la ausencia de microorganismos específicos para productos no estériles.
• Capítulo 370: Establece los protocolos para el control de esterilidad.
• Capítulo 340: Regula el test de pirógenos realizado en animales (conejos).
• Capítulo 330: Normatiza el test de endotoxinas bacterianas (LAL).

2. Disposiciones de la ANMAT

La autoridad sanitaria local (ANMAT) complementa la Farmacopea con regulaciones específicas:

• Disposición 7667/2010: Especifica detalladamente los límites microbiológicos según la forma farmacéutica (ej. uso rectal, oral, etc.).
• Regulación de 2018: Estableció la obligatoriedad de realizar y revalidar periódicamente el llenado aséptico (Media Fill) para procesos de fabricación de productos estériles.

3. Normativa Internacional (USP y Farmacopea Europea)

La conferencia destaca la importancia de estas referencias internacionales, especialmente cuando se busca armonización o criterios más específicos:

• USP (Farmacopea de EE. UU.): Se cita el Capítulo 61 para pruebas de recuento microbiano y la determinación de microorganismos particulares. También es la fuente de los estándares de endotoxinas (2000 unidades por ml) para calibrar ensayos.
• Comparativa de Criterios: Se menciona que, aunque la USP y la Farmacopea Europea coinciden en muchos protocolos, difieren en la interpretación de resultados de pruebas críticas, como en el test de pirógenos, donde la Farmacopea Europea utiliza un sistema de evaluación por suma de temperaturas en grupos sucesivos de conejos.

4. Buenas Prácticas de Manufactura (GMP)

El cumplimiento normativo no se limita al producto final. La legislación exige que la esterilidad se garantice a través de la vigencia de las buenas prácticas de manufactura, lo que incluye la validación de entornos, equipos y la calificación del personal.

Este marco asegura que cada metodología aplicada (como la filtración por membrana o la inoculación directa) esté estandarizada para ofrecer resultados reproducibles y fehacientes.

El control higiénico se aplica a productos que no requieren ser estériles de forma obligatoria (como comprimidos, cápsulas, soluciones orales y cremas) con el fin de determinar la cantidad de microorganismos presentes y garantizar que se mantengan dentro de los estándares de seguridad,.

A continuación, se detallan las etapas y requisitos de este proceso según la conferencia:

A. Ensayos preliminares y de validación

Antes de realizar la prueba específica sobre el producto, se deben ejecutar tres controles críticos para asegurar la validez de los resultados:

1. Control Negativo: Su objetivo es verificar que los reactivos y medios de cultivo utilizados no introduzcan contaminación al ensayo. Consiste en incubar las sustancias solas; no debe observarse ningún crecimiento microbiano.
2. Test de Promoción de Crecimiento: Verifica que los medios de cultivo sean aptos para permitir el desarrollo de microorganismos. Se desafían los reactivos inoculándolos con una cantidad pequeña de cepas patrón (aproximadamente 10 Unidades Formadoras de Colonia - UFC),. Se espera observar un crecimiento con un factor mayor a 2 respecto al inóculo inicial.
3. Test de Aptitud del Sistema (o del Método): Evalúa si la propia forma farmacéutica interfiere con el crecimiento microbiano. Por ejemplo, un antibiótico podría estar contaminado pero no mostrar crecimiento debido a su actividad intrínseca.
   • Estrategias de neutralización: Si el producto inhibe el crecimiento, se debe modificar el procedimiento aumentando el volumen del diluyente, incorporando agentes neutralizantes (como bisulfito de sodio para sales de mercurio) o utilizando filtración por membrana para retener los microorganismos y eliminar el producto,,.

B. Metodologías de Recuento

Para realizar el recuento, habitualmente se utilizan muestras de 10 gramos o 10 mililitros. La Farmacopea Argentina permite cuatro métodos principales:

• Filtración por membrana.
• Recuento directo en placa por vertido.
• Recuento en placa por extensión en superficie.
• Método del Número Más Probable (NMP).

C. Límites Microbiológicos y Especificaciones

El cumplimiento se determina evaluando dos ítems principales:

• TAMC (RTM): Recuento total de microorganismos aeróbicos.
• TYMC (RTCHL): Recuento total de hongos filamentosos y levaduras.

Interpretación de los límites: La normativa (como la Disposición ANMAT 7667/2010) utiliza notación científica para establecer los límites. En microbiología farmacéutica, esto se interpreta de la siguiente manera:

• Si el límite es \(10^1\), se aceptan hasta 20 UFC.
• Si el límite es \(10^2\), se aceptan hasta 200 UFC, y así sucesivamente.

Los límites varían según el uso del producto; por ejemplo, para productos de uso rectal, el límite es de \(10^3\) para aerobios y \(10^2\) para hongos y levaduras. Además del recuento total, se puede exigir la ausencia de microorganismos específicos (patógenos) dependiendo de la vía de administración, como la ausencia de Escherichia coli en productos de uso oral,.

El control de microorganismos específicos consiste en una serie de ensayos diseñados para determinar la ausencia o presencia limitada de patógenos particulares en un producto farmacéutico. A diferencia de los recuentos generales de aerobios u hongos, estas pruebas buscan detectar microorganismos que, por su peligrosidad o vía de administración del medicamento, no deben estar presentes.

A continuación, se detalla la información expuesta en la conferencia sobre este punto:

• Fundamento del Ensayo: Para determinar un microorganismo particular, se debe colocar la muestra en un medio de cultivo y realizar el ensayo bajo condiciones específicas que sean favorables para el crecimiento selectivo de dicho microorganismo.
• Marco Normativo: La conferencia menciona que la USP (Farmacopea de los Estados Unidos) codifica estas determinaciones en su capítulo 61, el cual trata sobre la prueba de recuento microbiano de microorganismos particulares.
• Requisitos Previos (Validación): Al igual que en el control higiénico general, no se puede realizar la prueba directamente sin antes cumplir con una batería de controles de calidad:
  1. Control negativo: Verifica que los reactivos y el entorno no estén contaminados.
  2. Test de promoción de crecimiento: Asegura que los medios utilizados sean aptos para desarrollar el microorganismo específico buscado.
  3. Test de aptitud del sistema: Demuestra que la forma farmacéutica no interfiere con la detección del patógeno.
• Manejo de Interferencias: Es fundamental determinar si el producto tiene actividad antibacteriana per se o si contiene tensioactivos. Si existe actividad antimicrobiana, se debe realizar una inactivación previa; si hay tensioactivos, se debe demostrar que estos no interfieren en el crecimiento de los microorganismos buscados.
• Interpretación de Resultados:
  • Estos ensayos se interpretan como presencia o ausencia.
  • Si se observa crecimiento de colonias en los medios selectivos, se debe proceder obligatoriamente a realizar pruebas de identificación específica para confirmar si se trata del patógeno en cuestión.
  • El producto se considera conforme si no hay desarrollo de colonias o si, tras el repique e identificación, se demuestra que el microorganismo que creció no es el que se estaba buscando.

Un ejemplo práctico mencionado es el de los productos de uso oral, donde la normativa exige específicamente la ausencia de Escherichia coli en una muestra de 1 gramo de producto.

El control de esterilidad es un requisito obligatorio para productos farmacéuticos como inyectables, colirios, polvos para inyección y dispositivos médicos. Este proceso está normatizado por el Capítulo 370 de la Farmacopea Argentina y presenta exigencias superiores a los controles de productos no estériles.

A continuación, se detallan los aspectos fundamentales de este control según la conferencia:

1. Ensayos de validación obligatorios

A diferencia de los productos no estériles, donde los controles de reactivos se hacen por lote de medio, en el control de esterilidad se debe realizar la batería completa de validación cada vez que se realiza la prueba. Esto incluye:

• Control negativo: Para asegurar que los reactivos y el entorno no contaminen la muestra.
• Test de promoción de crecimiento: Para verificar que los medios de cultivo son aptos para el desarrollo microbiano. Se utilizan habitualmente dos medios: TSB (para aerobios) y Tioglicolato (para anaerobios).
• Test de aptitud del sistema: Determina si el producto inhibe el crecimiento microbiano. Por ejemplo, en el caso de antibióticos betalactámicos, es necesario utilizar enzimas (beta-lactamasas) para destruir el antibiótico y permitir que cualquier microorganismo presente pueda desarrollarse y ser detectado.

2. Metodologías de trabajo

La conferencia destaca dos procedimientos principales para llevar a cabo el ensayo:

• Filtración por membrana: Se utilizan membranas de 0,45 micrones o menores (típicamente 0,22 micrones) con un diámetro de 50 mm. El producto se disuelve en una solución estéril, se filtra y luego se lava la membrana (sin exceder 1 litro de lavado) para eliminar restos de producto que puedan ser antimicrobianos. La membrana puede cortarse a la mitad para sembrarla en los dos medios de cultivo requeridos.
• Inoculación directa: Es un método más sencillo con menor manipulación, pero tiene la desventaja de que el producto puede enturbiar el medio de cultivo, dificultando la lectura. Se recomienda que el volumen del producto no supere el 10% del volumen del medio.

3. Condiciones de incubación y entorno

• Entorno: El ensayo debe realizarse en un entorno controlado (clase A) con operadores vestidos adecuadamente para evitar contaminaciones accidentales durante la manipulación.
• Tiempos y temperaturas: Las muestras deben incubarse durante 14 días. El medio para anaerobios (Tioglicolato) se mantiene a 32,5 ± 2,5 °C, mientras que el medio para aerobios (TSB) se mantiene a 22,5 ± 2,5 °C.

4. Interpretación y validez de los resultados

• Detección de fallas: Si el medio se vuelve turbio, se sospecha de crecimiento microbiano. Si la turbidez es causada por la propia forma farmacéutica, se debe realizar un repique a un nuevo medio y esperar al menos 4 días más para confirmar la ausencia de crecimiento.
• Criterios de re-ensayo: El ensayo solo puede repetirse si se demuestra fehacientemente una falla en el procedimiento, en los controles ambientales o en los reactivos. Si no hay una causa de error externa verificable, el producto debe ser rechazado.
• Limitación estadística: El orador subraya que un resultado de "estéril" en la prueba no garantiza por sí solo que todo el lote lo sea, ya que la contaminación suele ser puntual y no generalizada. Por lo tanto, la seguridad absoluta del producto depende de la conjunción del test con el cumplimiento de las Buenas Prácticas de Manufactura (GMP) y el monitoreo ambiental constante.

El control de pirógenos y endotoxinas bacterianas es un requisito crítico para garantizar la seguridad de los productos farmacéuticos estériles, ya que estas sustancias pueden provocar reacciones febriles graves en los pacientes,.

A continuación, se detallan los conceptos, metodologías y criterios de evaluación tratados en la conferencia:

1. Definición y Origen de los Pirógenos

Los pirógenos son sustancias que causan un aumento de la temperatura corporal y se clasifican en dos tipos:

• Exógenos: Sustancias externas como microorganismos (bacterias, virus, hongos) o toxinas,.
• Endógenos: Respuestas internas del organismo, como la liberación de interleuquinas o el factor de necrosis tumoral,.

Dentro de los pirógenos exógenos, las endotoxinas bacterianas son de especial interés; se trata de lipopolisacáridos presentes en la pared celular de las bacterias Gram-negativas,. Un aspecto crítico mencionado es que los métodos de esterilización por calor húmedo pueden eliminar la bacteria, pero al romper su pared, liberan las endotoxinas, por lo que un producto puede ser estéril pero seguir siendo pirogénico.

2. Test de Pirógenos en Conejos

Este ensayo biológico busca medir la respuesta febril tras la inyección del producto en conejos adultos sanos,.

• Procedimiento: Se utiliza un volumen máximo de 10 ml por kilo de animal. Es fundamental el uso de elementos estériles y depirogenados (250°C por 30 minutos) y soluciones certificadas libres de pirógenos.
• Monitoreo: Se registra la temperatura rectal de forma continua durante el ensayo; los animales con una temperatura basal superior a 39,8°C son descartados,.
• Limitaciones: Este test no es válido para analizar sustancias con propiedades antipiréticas (como antitérmicos), ya que enmascararían la posible respuesta del conejo.

3. Criterios de Evaluación: USP vs. Farmacopea Europea

Existen diferencias sustanciales en cómo se interpretan los resultados del test en conejos:

• Criterio USP: Se inicia con un grupo de 3 conejos. Se aprueba si ninguno aumenta su temperatura más de 0,5°C. Si falla, se suma un grupo de 5 conejos más (total 8); el producto se aprueba si no más de 3 conejos superan el aumento de 0,5°C y la suma de todos los incrementos no excede los 3,3°C,.
• Criterio Farmacopea Europea: Evalúa la suma de las diferencias entre la temperatura máxima y la basal en grupos sucesivos de tres conejos. El límite de aprobación para los primeros tres es de 1,15°C; si la suma está entre 1,15°C y 2,65°C, se agregan otros tres, y así sucesivamente hasta un máximo de 12 conejos, donde la suma total no debe superar los 6,6°C,.

4. Test de Endotoxinas Bacterianas (LAL)

Es un ensayo in vitro basado en el lisado de amebocitos del cangrejo de herradura (Limulus polyphemus), el cual precipita en presencia de endotoxinas,.

• Técnicas disponibles:
  1. Gel-clot (Gelificación): Se observa la formación de un coágulo firme en el tubo que no se desprende al invertirlo,,.
  2. Turbidimetría: Mide el aumento de la turbidez durante la reacción.
  3. Cromogénica: Utiliza un reactivo que genera color proporcional a la cantidad de endotoxina presente.

5. Cálculos y Validación del LAL

Para asegurar la precisión del test de LAL, se deben realizar cálculos y validaciones específicas:

• Estándar de referencia: Se utiliza un estándar de la USP con una potencia de 2000 unidades de endotoxina (UE) por mililitro.
• Límite de aceptación: Se calcula mediante una constante K (que depende de la vía de administración), el peso corporal y la dosis del medicamento,.
• Dilución Máxima Válida (MVD): Es el límite de endotoxinas permitido dividido por la sensibilidad del reactivo utilizado; define hasta cuánto se puede diluir la muestra sin perder la capacidad de detectar la contaminación.
• Validación: Antes del ensayo, es obligatorio re-verificar la sensibilidad del reactivo y realizar pruebas de inhibición o amplificación para asegurar que la forma farmacéutica no interfiera con la formación del coágulo,,.

El monitoreo ambiental es un componente crítico del control de calidad, ya que la esterilidad de un producto no puede garantizarse únicamente con el ensayo final; depende de mantener bajo control el entorno y al personal involucrado en la producción.

A continuación, se detallan los métodos, frecuencias y límites tratados en la conferencia:

1. Muestreo de Aire

Existen dos enfoques principales para evaluar la carga microbiana en el aire:

• Métodos Pasivos (Sedimentación): Consiste en exponer placas de Petri (habitualmente de 90 mm de diámetro) en puntos estratégicos del área para que los microorganismos suspendidos caigan sobre el medio de cultivo.
  • Limitación: El tiempo de exposición no debe exceder las 4 horas para evitar la deshidratación del medio.
  • Ventajas: Es económico, no interfiere con el flujo de aire y no requiere personal adicional en el área.
• Métodos Activos (Volumétricos): Utilizan equipos que fuerzan el paso de un volumen determinado de aire (típicamente 1 metro cúbico) para que las partículas impacten directamente sobre el medio de cultivo.
  • Tipos de muestreadores: El de ranura (el aire pasa por un orificio y golpea la placa) y el centrífugo (utiliza una turbina para aspirar el aire).

2. Control de Superficies y Personal

Se busca recuperar microorganismos de paredes, pisos, equipos, utensilios y de los propios operarios.

• Placas de contacto (RODAC): Permiten hacer una "impresión" directa de la superficie sobre el medio de cultivo, facilitando la recolección.
• Hisopados: Se utilizan para superficies irregulares mediante una técnica de cuadrícula.
  • Desventajas: Requiere validar la capacidad de recuperar los microorganismos del hisopo y existe el riesgo de que el hisopo deje pelusas en el área.
• Personal: Se monitorea específicamente la carga microbiana en guantes y vestimenta. El ser humano es la principal fuente de contaminación debido al desprendimiento natural de partículas y posibles fallas en el entrenamiento o vestimenta.

3. Frecuencia del Monitoreo

La normativa exige que la frecuencia esté basada en el riesgo y el tipo de área:

• Clases A y B: El monitoreo debe ser constante durante cada lote productivo de productos estériles.
• Zonas de apoyo (Clase C o D): Las frecuencias pueden ser menores, por ejemplo, una o dos veces por semana, según lo establezca el procedimiento operativo de la empresa.

4. Límites y Resultados Esperados

Los límites permitidos de Unidades Formadoras de Colonia (UFC) varían según la clasificación del área:

Tipo de Control	Clase A	Clase C	Clase D
Aire (UFC/m³)	< 3	< 20	< 100
Superficies (UFC/placa)	< 3	5 a 10	-
Guantes (Personal)	< 3	< 10	-
Vestimenta (Personal)	< 5	< 20	-

(Datos basados en las tablas de límites y recomendaciones mencionadas en la fuente)

La validación del llenado aséptico, conocida técnicamente como Media Fill, es un proceso crítico en la industria farmacéutica para productos estériles. Consiste en reemplazar el producto real por un medio de cultivo (generalmente TSB) que facilite el crecimiento microbiano, con el fin de evaluar si el sistema de fabricación es capaz de mantener la esterilidad.

A continuación, se detallan los aspectos clave de este punto tratados en la fuente:

1. Objetivo de la Validación

El propósito fundamental no es probar el producto, sino evaluar el diseño y funcionamiento del sistema productivo en su conjunto. Esto incluye:

• La aptitud del personal y su comportamiento dentro del área.
• La integridad del ambiente y los equipos.
• La identificación de posibles puntos críticos de control donde pueda existir influencia humana o fallas técnicas.

2. Parámetros del Ensayo

Para que la validación sea representativa, debe simular fielmente las condiciones reales de producción:

• Cantidad de unidades: Habitualmente se llena el 10% del tamaño del lote productivo normal.
• Selección del envase: Se suele elegir el envase de mayor volumen o aquel que represente el mayor tiempo de exposición, ya que es más propenso a la contaminación.
• Velocidad de llenado: Debe ser la de rutina, permitiendo que el medio de cultivo fluya correctamente.
• Intervenciones: El ensayo debe ser lo suficientemente largo para incluir todas las actividades habituales, como cambios de turno, ingresos del personal de mantenimiento e intervenciones de rutina (ajustes de máquinas, cambios de guantes, etc.).
• Incubación: Las unidades se inspeccionan y se incuban (habitualmente a dos temperaturas, entre 20-25°C y 30-35°C) para detectar bacterias, hongos y levaduras.

3. Marco Regulatorio y Frecuencia

Desde 2018, la legislación argentina establece la obligatoriedad de realizar y revalidar periódicamente este proceso de llenado aséptico para garantizar la seguridad de los medicamentos.

4. Criterios de Aceptación

Aunque existen cálculos estadísticos que permiten niveles mínimos de contaminación (como menos del 0,1% con un 95% de confianza), el orador destaca que, dado que se trata de medicamentos, el objetivo ideal de aceptación debe ser cero unidades contaminadas.

5. Investigación de Fallas mediante Gráficos

Cuando se detecta contaminación en un Media Fill, se utilizan gráficos que relacionan la cantidad de unidades contaminadas con el tiempo o el orden de llenado para identificar la causa raíz:

• Contaminación constante o salto abrupto: Suele indicar una falla técnica grave, como la rotura de una manguera, falla en un filtro de esterilización o problemas en el flujo laminar.
• Nivel inicial elevado que disminuye: Es un indicador típico de una falla en la limpieza inicial de la línea productiva, la cual se va "limpiando" con el paso del propio medio de cultivo.
• Pico de contaminación puntual: Generalmente se asocia a una intervención humana inadecuada o una maniobra mal realizada en un momento específico del proceso.
• Fluctuaciones aleatorias: Son las más difíciles de solucionar, ya que suelen deberse a errores complejos de infraestructura o fallas intermitentes del personal.

MICROBIOLOGIA PARA CONTROL DE CALIDAD DE MEDICAMENTOS

Ivan Patoff

25 mayo 2020

Enlace para ver conferncia y resumen de la misma en el siguiente enlace permanente

https://apuntesdoctorluiscarlo.blogspot.com/2023/10/micribiologia-para-control-de-calidad.html

Sumario

A continuación, se presenta un listado numerado de los temas principales tratados en la conferencia sobre microbiología en el control de calidad farmacéutico:

1. Clasificación de productos farmacéuticos: Se establece la división fundamental entre productos estériles (inyectables, colirios, polvos para inyección) y no estériles (comprimidos, cápsulas, cremas),.
2. Marco regulatorio y normativo: Referencias a la Farmacopea Argentina (capítulos 90, 370, 340 y 330), la Farmacopea de Estados Unidos (USP), la Farmacopea Europea y las disposiciones de la ANMAT,,,,,.
3. Control higiénico para productos no obligatoriamente estériles:
   • Realización de controles negativos, test de promoción de crecimiento (aptitud de los medios de cultivo) y test de aptitud del sistema (interferencia de la forma farmacéutica),,,.
   • Estrategias para neutralizar la actividad antimicrobiana intrínseca del producto,.
   • Metodologías de recuento (filtración por membrana, vertido en placa, extensión y número más probable) y límites microbiológicos establecidos,,.
4. Control de microorganismos específicos: Pruebas de ausencia o presencia limitada de patógenos particulares mediante ensayos en condiciones específicas,,.
5. Control de esterilidad:
   • Requisitos de entorno y vestimenta del operador,.
   • Métodos de filtración por membrana e inoculación directa,.
   • Tiempos y temperaturas de incubación en medios TSB y Tioglicolato,.
   • Interpretación de resultados y criterios para la repetición de ensayos,.
6. Pirógenos y Endotoxinas Bacterianas:
   • Diferencia entre pirógenos endógenos y exógenos (endotoxinas de bacterias Gram negativas),,.
   • Test de pirógenos en conejos: Procedimiento, criterios de la USP vs. Farmacopea Europea e interpretación de la suma de incrementos de temperatura,,,.
   • Test de Endotoxinas Bacterianas (LAL): Técnicas de gelificación (gel-clot), turbidimetría y cromogénicas,,.
   • Cálculos de límite de endotoxinas y dilución máxima válida (MVD),.
7. Monitoreo ambiental:
   • Muestreo de aire: Métodos pasivos (sedimentación) y activos (volumétricos como el de ranura o centrífugo),,.
   • Control de superficies mediante hisopados o placas de contacto (placas RODAC),,.
   • Evaluación microbiológica del personal (guantes y vestimenta),.
   • Frecuencia de monitoreo y límites permitidos según la clase de área (A, B, C, D),,.
8. Validación del llenado aséptico (Media Fill):
   • Objetivo de evaluar la susceptibilidad de contaminación del sistema (personal, ambiente, equipos),.
   • Parámetros del ensayo: Selección de medios de cultivo, cantidad de unidades a llenar, velocidad de llenado e intervenciones del personal,,,.
   • Criterios de aceptación e investigación de fallas mediante el análisis de gráficos de contaminación,,.